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技(jì)術(shù)平台

高(gāo)通(tōng)量測序 Sanger測序法 熒光(guāng)定量PCR 熒光(guāng)原位雜(zá)交FISH

  • 高(gāo)通(tōng)量測序

    原理(lǐ)：新一(yī)代測序的(de)技(jì)術(shù)原理≤ α↔(lǐ)是(shì)采用(yòng)可(k₹σě)逆性末端邊合成邊測序反應,首先在 DNA片段兩端加上(shà™★≠ng) 序列已知(zhī)的(de)通(tōng)用(yòn✘☆g)接頭構建文(wén)庫,文(wén)庫加載到(dào£Ω)測序芯片F1owcell上(shàng),文(wén)庫 ₹‌÷兩端的(de)已知(zhī)序列與F1owcell 基底上(s>♠↑γhàng)的(de)oligo序列互補,每條文(wén)庫片段都λ‍↔₽(dōu)經過橋式PCR擴增形成一(yī)個(g♦★₹™è)簇,測序時(shí)采用(yòng)邊合'δ♦成邊測序反應, 即在堿基延伸過程中,每個(gè)循環反應λ<隻能(néng)延伸一(yī)個(gè)正确互補的(de)堿基,根據四種不(≥÷bù)同的(de)熒光(guāng)信号确認堿 ∏₹&∏ 基種類,保證最終的(de)核酸序列質量,經過多(d•φ&uō)個(gè)循環後,完整讀(dú)取核酸序列。​<φ

    儀器(qì)：Illumina NextSeq500高(gāo)通(tōn®‍g)量測序平台,不(bù)僅具有(yǒu)高(gāo)通(tōn σ g)量測序能(néng)力和(hé)台式測序儀即載即開(kāi)(loαβφ​ad-and-go)的(de)簡 便性,而且是(shì)↓↔≠唯一(yī)一(yī)個(gè)在人(rén)類全基因組測序中可(kě)一(yδ↓ī)次性高(gāo)覆蓋運行(xíng)的(de) NGS系統。

  • Sanger測序法

    原理(lǐ)：Sanger測序法的(de)技(jì)術(shù)原理(l∞¶♠ǐ)是(shì)在DNA聚合酶的(de)作(zuò)用(yò≥ ng)下(xià)，将dNTP/ddNTP的(de)混™ 合物(wù)加到(dào)特異 £✔ 性引物(wù)的(de)末端。産生(shēng)長(chán®•>g)短(duǎn)不(bù)等的(de)寡核苷酸鏈，并帶有(yǒu)與₹•♦✔四種堿基對(duì)應熒光(guāng)标記。當×¥π帶有(yǒu)熒光(guāng)标記的(de)寡核苷±↔∏★酸鏈 混合物(wù)通(tōn$<×£g)過測序儀毛細管進行(xíng)電(diàn)泳分(fēn¥λ♥)離(lí)時(shí)，就(jiù)能(néng)根據熒光(guāng)÷α顔色判斷對(duì)應堿基，而根據熒光(guāng)信号出現(xiàn)的←↕λ(de)先後順序， 判斷對(duì)應堿基在序列中所處¶€α的(de)位置。

    儀器(qì)：ABI 3500基因分(fēn)析儀為(wèi)支持¥ε↕‍驗證和(hé)法規規範環境中對(duì)儀器(qì)性能(néng)±✔的(de)嚴格要(yào)求而設計(jì≈✔α)， 同時(shí)保留了(le)生(shēng ↓)命科(kē)學研究人(rén)員(yuán)心目中Ap®₽₹σplied Biosystems産品一(yī)貫擁有(yǒu)的(de)無可(§↑≤♥kě)匹敵的(de)應用(yòng)多(duō)功能α ∏(néng)性。

  • 熒光(guāng)定量PCR ←€

    原理(lǐ)：PCR技(jì)術(shù)的(de)基‍•☆本原理(lǐ)類似于DNA的(de)天然複'©>≈制(zhì)過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的(de)寡核苷酸引物÷♥(wù)。 PCR由變性--退火(huǒ)--延伸三個(gè÷∑↔☆)基本反應步驟構成：①變性：模闆DNA經加熱(rè)至93℃左右一(yī)πλ↔™定時(shí)間(jiān)後，使模闆DNA雙鏈解離(lí)成單♠"鏈， 以便它與引物(wù)σ₩♦∞結合，為(wèi)下(xià)輪反應作(zuò)準備；②複性：模闆DNA'γ±✘經加熱(rè)變性成單鏈後，溫度降至55℃左右，引☆♥物(wù)與模闆DNA單鏈的(de)互 '← 補序列配對(duì)結合；③延伸≈£§↕：DNA模闆--引物(wù)結合物(wù)在TaqDNA聚 ☆ 合酶的(de)作(zuò)用(yòng)♦±下(xià)，以dNTP為(wèi)反應原'♥₩料，靶序列為(wèi)模闆，按堿基配對(duì) 與半保留≠☆≠複制(zhì)原理(lǐ)，合成一(yī)條新的(de)與模闆DNA 鏈互補的εΩ↕(de)半保留複制(zhì)鏈。重複循環♥¥☆變性--退火(huǒ)--延伸三過程，就(jiù)可÷ (kě)獲得(de)更多(duō)的(de) ±↓ “半保留複制(zhì)鏈”，而且這₽γ‌(zhè)種新鏈又(yòu)可(kě)成為(wèi)下(xià)∏>"↕次循環的(de)模闆。每完成一(yī)個(gè)循環需1～2分(fē‍∏✘n)鐘(zhōng)， 1～2小(xiǎo)時↕≤(shí)就(jiù)能(néng)将待擴目的(de)基因擴增↑>π" 放(fàng)大(dà)幾☆σ↓€百萬倍。

    儀器(qì)：Roche LightCycler? 480實時(s" ™hí)熒光(guāng)定量PCR系統可(kě®♥)以讓你(nǐ)實現(xiàn)實時(shí)在線的(de)←₹高(gāo)通(tōng)量快(kuài∏©")速熒光(guāng)定量PCR 循環© Ω₹，可(kě)同時(shí)檢測96或384孔闆樣品。結果可(kě)以通(tō≈♦ng)過PCR循環過程中實時(shí)熒光(guāng)采集和(h₩£é)軟件(jiàn)分(fēn)析進行(xíng)♠§σ定量和(hé)基因型的(de)分(fēn)析。 複雜(zá≤≤)的(de)光(guāng)學檢測系統可(kě)以進行(x©δ ↔íng)多(duō)重PCR檢測，并适用(¥βyòng)于多(duō)種檢測模式。超過10年(nián)的(≥φ©∏de)實時(shí)定量PCR系統與試劑研發的(de)豐富經驗， ✘↔ 凝聚成今日(rì)業(yδ§♠è)界的(de)巅峰之作(zuò)。

  • 熒光(guāng)原位雜(zá)交FISH

    原理(lǐ)：FISH的(de)基本原理(lǐ)是(shì)用(yòng ♠Ω₹)已知(zhī)的(de)标記單鏈核酸為(wèi)探針，按照(zδ→hào)堿基互補的(de)原則，與待檢材料中未知(zhī)的(de)₽δ$單鏈 核酸進行(xíng)異性結合，形成可₽δεΩ(kě)被檢測的(de)雜(zá)交雙鏈核酸。由于DNA分(∏ fēn)子(zǐ)在染色體(tǐ)上(shàng)是(shì)沿著(zh& ♠e)染色體(tǐ)縱軸呈線性排列，因而可(kě)以探針直 ✘♦δ∏ 接與染色體(tǐ)進行(xíng)雜(zá)交從(cóng'§ )而将特定的(de)基因在染色體(tǐ)上(shàng)定位。與傳統的("∏$​de)放(fàng)射性标記原位雜(zá)交相(x €iàng)比，熒光(guāng)原位雜(zá)交具有(yǒu& ♠)快(kuài)速、檢測 信号強、雜(zá)交特α&✔異性高(gāo)和(hé)可(kě)以多(duō)重染色等特點。ππ

    儀器(qì)：Leica DM 2500熒光(guāng)顯微(wēiγ♥§¥)鏡捕獲并結合多(duō)通(tōng)道(dào)熒光(guā>β'ng)圖像，可(kě)産生(shēng)完美(měi)的(de)FISH圖像，∏ ✔♠以實現(xiàn)文(wén)檔處理(lǐ) 和$✘(hé)審查；強大(dà)的(de)分(fēn)析軟件(jiàn)可(♣★♣"kě)反轉對(duì)比染色和(hé)疊加探測來(β< lái)精确地(dì)定位熒光(guāng)信号，以保證結果的(deφ​₩)準确性。